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水产病害检测现状与金标卡壳胶体金免疫层析技术的应用
发布时间:2017-04-23        浏览次数:7        返回列表
  随着我国水产集约化养殖业的迅速扩大,日趋严重的病害威胁己经成为影响产业发展的主要瓶颈之一;与此同时,随着人们对于食品安全和环境保护意识的不断增强,选择科学合理、绿色环保的养殖模式己是今日养殖业发展的主要方向。为此要求养殖业者务必做好生产全过程的病害防治工作,尤其早期预防至关重要,因而建立水产病害快速准确的检测方法、建立早期诊断技术就成为当前防控病害威胁最为紧迫的任务之一。
  当前,水生动物病害的诊断检测方法主要包括病原学和血清学检测。病原检测通常包括病原分离及生理生化鉴定、病毒核酸成分检测等,目前普遍使用的有PCR技术、Real-timePCR诊断技术、Lamp扩增技术,以及16SrRNA基因探针杂交技术等。而以抗原抗体特异性结合为基础而设计的各种血清学实验,也己广泛应用于鱼类各种传染性疾病和部分寄生虫的诊断,主要包括血凝和血凝抑制试验、ELISA、中和试验、免疫荧光技术等。但是这些检测方法由于操作繁琐、检测周期长、检测成本高等原因而在实际应用中受到很大的限制。因此,建立快速、灵敏、准确、简便易行的早期快速检测方法己是水产界刻不容缓的需求。
  以金标卡壳胶体金免疫层析原理建立起来的快速检测试纸,不需要专业技能和仪器,操作简单,易于推广,现己在我国水产领域得到了初步尝试。何艳玲等(2007)建立了水产品中O1群霍乱弧菌Vibriocholeae的胶体金免疫层析快速检测方法,该方法检测水产品中O1群霍乱弧菌的灵敏度为100000CFU/ml,与食品中常见的致病菌无交叉反应;检测的假阳性率为6.25%,表明该方法操作简便,灵敏度高,特异性强,准确率高,适用于水产品质量安全的快速检测。Cheng等(2007)建立了对虾白斑综合征病毒(WSSV)的胶体金免疫层析快速检测试纸的制备技术,结果表明,该方法的测定结果与PCR检测结果一致。但是迄今为止,尚未见有其他水产领域,尤其在海水养殖动物中的相关报道。目前,作者基于该技术的优势及其在水产动物养殖领域中应用的可行性,在“国家坪蝶类产业技术体系”和“农业部公益性行业科研重大专项”及“山东省博士后创新项目专项资金”资助下,已经开展了海水鱼类重要疾病的快速检测技术的探索和研发,以期建立起适于海水鱼类疾病早期快速检测的新技术。
  基于目前胶体金免疫层析快速诊断技术的研究应用现状,今后该技术的发展将主要集中于:首先,金标卡板检测试纸的最大优势在于能简便快捷测定靶目标,在此基础上进一步加强其检测的敏感性和特异性:(1)采用信号放大系统,如生物素一亲和素系统或免疫金银染色法进行银加强等,结合相应的简单检测仪器,进一步提高检测灵敏度,拓宽检测范围。(2)采用新的标记系统,如荧光标记、量子点标记等。(3)与分子生物学方法结合,检测病原的核酸,如PCR-试纸、LAMP(环介导等温扩增)一试纸,即先对目的片段进行扩增并进行标记,再以试纸检测其特异性核酸。第二,在同一膜上作多种项目测定和多项目的组合测定,实现检测多元化。第三,结合酶显色以及借助简单仪器(如比色计等)实现半定量或定量检测。在达到检测快速而简便的前提下,今后应尽可能提高检测的特异性和敏感度,减少假阳性和假阴性,这对用于自检的免疫层析产品极其重要。当前,该项病害快速检测技术在人医和兽医领域已被广泛应用并得到迅速发展,而在水产领域目前仅见少量零星研发报道。今后如将该项技术引入水产领域,建立适于水产动物特点的快速检测技术,并形成水产专用的快速检测试纸产品,则不仅可以改变水产动物病害早期检测技术的落后面貌,而且还可以大幅度地提高早期诊断水平。因此可以预见其发展空间非常巨大。
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